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重組鏈霉親和素濃度測定方法

更新時間:2024-05-23 點擊量:70

重組鏈霉親和素濃度測定方法


產品名稱:重組鏈霉親和素
英文名稱:Recombinant Streptavidin, r-SA
貨號:B2340
規 格:1 mg,10 mg,100 mg,500 mg
純 度:≥95%(SDS-PAGE 檢測)
存儲條件:-20℃保存

產品形式:冷凍干粉(5mM 磷酸鉀鹽緩沖液、海藻糖,pH 8.0) 

分子量:四聚體 62.4kDa,單體 15.6kDaSDS-PAGE 檢測單體約為 16.5 kDa) 

活性:≥15U/mg 蛋白(Green 改良法測定) 

濃度測定:紫外吸收法,消光系數 E(0.1% at 280 nm) =3.22 

內 毒 素:≤5EU/mg 

 

來 源:大腸桿菌發酵工程菌株 


相關介紹: 

鏈霉親和素(Streptavidin,SA)是阿維丁鏈霉菌(Streptomyces avidinii)在生長過程中分泌的 一種同型四聚體蛋白。同親和素一樣,一摩爾的鏈霉親和素可以結合四摩爾的生-物素,與生-物素具 有很高的親和力。由于 SA 不含糖基且等電點接近于中性,因此 SA 在檢測應用中具有比親和素更 低的非特異性結合水平。 該制品已被廣泛應用于多種生物技術領域,諸如:包被免疫檢測用微孔板,制備 SA 偶聯酶制 劑,SA 偶聯熒光素、SA 偶聯磁珠等,進而參與酶聯免疫吸附和酶催化放大實驗,免疫組化化學、 生物分子純化、生物傳感器、生物納米微球、預靶向制藥研究和生物芯片被料等。 (該重組鏈霉親 和素 端含 His-Tag 標簽,pI7.0) 

使用方法:(僅供參考) 

由于產品生產工藝中凍干環節會引入保護劑等,為減少您的實驗誤差,建議先通過內部檢測方 法,產品中蛋白進行準確定量后,再進行后續實驗,并按實際情況進行產品用量調整。建議優先選 擇紫外吸收法進行定量,方法如下: 將樣品從低溫條件下拿出后,平衡至室溫,并擦去瓶外附著的冷凝水,小心打開瓶蓋,防止干 粉飛濺損失。用去離子水或緩沖液進行復溶,充分溶解后,稀釋至合適濃度,小心移入比色皿中, 以去離子水或緩沖液為空白對照,測定樣品在 280 nm 處的吸光值(建議吸光值控制在 0.1-1.5 區間 內),將其代入以下公式計算蛋白質濃度: C = N × A280nm E(0.1% at 280nm)式中:C:樣品原液的蛋白質質量濃度(mg/mL) A280nm:蛋白質溶液在 280nm 處測得的吸光值 N:稀釋倍數 E(0.1% at 280nm)1 mg/mL 蛋白質的消光系數 例如將本產品凍干粉充分溶解并混勻后,取適量原液稀釋10倍,測得其在280 nm處的吸光值為0.966, 則原液的蛋白濃度為 10×0.966/3.22=3 mg/mL。 

注意事項: 

1. 鏈霉親和素凍干粉易溶于水,溶解性可達 10 mg / mL 或更高; 

2. 建議使用純水溶解; 

3. 如有未溶解物質,建議延長復溶時間。也可以通過離心或其他方式除去不溶物后,再用于后 續實驗,不會對總蛋白產生很大的影響。 

4. 考慮到蛋白質特殊性,凍干粉建議現用現配,溶解后應避免反復凍融,如需多次使用,建議 按需分裝后凍存(-20℃);避免在 4℃下長期存放。

 

重組鏈霉親和素

 


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